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Concejos de Análisis diario; Generalidades del HPLC

Consejos HPLC

¡Hola! Te doy la bienvenida a nuestra nueva sección, concejos de análisis diario, donde te daremos consejos, hablaremos de problemas que se presentan de manera cotidiana en los laboratorios y equipos entre otras cosas. El día de hoy hablaremos del HPLC.

Siendo esta la primera parte de nuestra sección me enfocare en lo más básico de la técnica y cada semana iremos profundizando, en esta ocasión nos enfocaremos en la técnica analítica HPLC, poco a poco iremos integrando diversos equipos y análisis que puedan aparecer en tu laboratorio, y si deseas que nos enfoquemos en alguna técnica instrumental, déjanoslo saber en los comentarios, los leeremos todos.

Me presento, mi nombre es Jesús uno de los tres especialistas en Analitek que estarán apoyándote en esta sección. Ahora bien, comencemos.

HPLC es una abreviatura de cromatografía líquida de alta resolución, y como bien sabemos la "cromatografía" es una técnica de separación, el "cromatograma" es el resultado de la cromatografía y el "cromatógrafo" es el instrumento utilizado para realizar la cromatografía.

Entre las diversas tecnologías desarrolladas para la cromatografía, algunos de los componentes clave de los cromatógrafos son los dispositivos dedicados a la separación molecular denominados columnas y las bombas de alto rendimiento para suministrar disolvente a un caudal estable. A medida que las tecnologías relacionadas se volvieron más sofisticadas, el sistema comúnmente conocido como cromatografía líquida de alto rendimiento, simplemente pasó a denominarse "LC". Así como la cromatografía líquida de ultra alto rendimiento (UHPLC), capaz de realizar análisis de alta velocidad, hoy en día se ha generalizado.

La HPLC separa los compuestos disueltos en una muestra líquida y permite el análisis cualitativo y cuantitativo de qué componentes y cuánto de cada componente están contenidos en la muestra.

En la figura 1 podemos observar una descripción básica del proceso de HPLC.

generalidadesHPLCFig.1 Descripción general de HPLC

 

El disolvente utilizado para separar los componentes en una muestra líquida para el análisis de HPLC se denomina fase móvil.

Por tanto, la cromatografía comprende procesos en los que los componentes de una mezcla, disueltos en una fase móvil, se van desplazando con diferente velocidad a través de una fase estacionaria. La adecuada elección de estas fases puede permitir que tales diferencias se traduzcan en una separación efectiva de los solutos, a la vez que éstos pueden identificarse atendiendo a su particular velocidad de avance.

La fase móvil se envía a una columna de separación, también conocida como fase estacionaria, y luego al detector a un caudal estable controlado por la bomba de suministro de disolvente. Se inyecta una cierta cantidad de muestra en la columna y se separan los compuestos contenidos en la muestra. Los compuestos separados en la columna son detectados por un detector corriente abajo de la columna y cada compuesto es identificado y cuantificado.

Por tanto, podemos resumir que la cromatografía de líquidos comprende procesos en los que los componentes de una mezcla, disueltos en una fase móvil, se van desplazando con diferente velocidad a través de una fase estacionaria. Y mediante la adecuada elección de estas fases puede permitir que tales diferencias se traduzcan en una separación efectiva de los solutos, a la vez que éstos pueden identificarse atendiendo a su particular velocidad de avance.

En cuanto a la naturaleza del proceso cromatográfico, los componentes disueltos de una mezcla se mueven continuamente entre las dos fases, se asocian momentáneamente con la fase estacionaria, no migran, mientras todos los componentes momentáneamente presentes en la fase móvil migran a la misma velocidad que ésta. Entonces, la separación no ocurre en ninguna de las dos fases, sino que es el resultado de continuos movimientos de las moléculas entre ellas. Los componentes se separan cuando uno de ellos pasa a una velocidad diferente en la fase estacionaria respecto del resto. El tiempo empleado por cualquiera de los componentes en la fase estacionaria depende de su afinidad por ésta en las condiciones ensayadas.

¿Cómo establecer los tiempos?, ¿Cómo puedo escoger una correcta fase según mi analito?, ¿Cuáles son los equipos de mayor tecnología? ¿Qué problemas puedo encontrar en mi columna cromatográfica?

Bien son temas que iremos hablando poco a poco, por ahora solo me queda decir que, con el desarrollo de la tecnología, las técnicas cromatográficas se diversificaron y mejoraron sensiblemente su capacidad para resolver mezclas de distinta naturaleza y gracias a ello se ha convertido en método de separación es tan potente y de aplicación tan general indispensable para cada área de investigación, desarrollo y calidad de producto.

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Jesus Nacianceno

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