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Los problemas más comunes en equipos de HPLC y cómo resolverlos  parte II

Los problemas que encontramos con mayor frecuencia en el sistema y las columnas son la presión, forma del pico y la retención. En el blog anterior mencionamos una de las partes caras del equipo de cromatografía de líquidos, la columna cromatográfica. Y nos concentramos en la limpieza que la columna requiere para su buen funcionamiento.

Ahora nos enfocaremos en la forma del pico. El pico es la porción del cromatograma que registra la respuesta del detector cuando un componente individual eluye de la columna. El pico puede ser definido por su área, altura y ancho a la mitad de la altura, o altura y ancho en la línea de base. Si la separación es incompleta, se puede registrar la elución de dos o más componentes como un pico no resuelto.

Con esto nos encontramos, respecto a la forma del pico, múltiples problemas entre ellos; picos divididos, colas en los picos o picos anchos (mala resolución). Los picos dobles aparecen por; perturbación en el flujo por volumen muerto, el flujo de la muestra por diferentes vías a través de la columna, pobre empaquetamiento, un pH alto provocando la disolución de la sílice. Algo similar ocurre cuando la frita se encuentra obstruida.

Los picos divididos aparecen por el efecto de solventes de inyección más fuertes que las fases móviles, incluso pueden provocar ensanchamiento de pico, es necesario mantener la concentración de orgánico en solvente de muestra menor o igual a la fase móvil. Las colas presentes en los picos del cromatograma pueden presentarse mediante interacciones secundarias (efectos de retención), interacciones con residuos, pico pequeño eluyendo en la cola de un pico mayor, acumulación de contaminación en la columna entre otros. También encontramos los picos con frente o fronting y suceden cuando se satura la columna cromatográfica.

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Algunas soluciones para evitar estos picos en el cromatograma del HPLC son; usar tubos cortos de un diámetro interno pequeño entre el inyector y la columna y entre la columna y detector. Inyecte pequeñas cantidades de muestra, para evitar taponeo en las columnas y disminuir la posible contaminación. Verifique las conexiones del inyector-columna, ya que si estos se encuentran demasiado largos encontraremos fuga, y por el otro lado si son demasiado cortos se generará un volumen muerto.

De forma resumida, hablamos de una verificación de la aptitud del sistema, es una parte integral de los métodos de cromatografía. Estas pruebas tienen por objeto verificar que el sistema cromatográfico resulta adecuado para el análisis que se pretende efectuar. Las pruebas se basan en el concepto de que el equipo, los sistemas electrónicos, las operaciones analíticas y las muestras analizadas constituyen un sistema integral que se puede evaluar como tal. No olvides contactar a nuestros expertos Analitek busca siempre estar a tu servicio y con nuestra compañía hermana Rekner podremos ayudarte en cualquier problema que encuentres en tu equipo HPLC, síguenos en redes sociales y lee nuestro contenido extendido ebooks. Recuerda que tu éxito es nuestra pasión.

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Delia Serna Guerrero
Delia Serna Guerrero

Especialista en aplicaciones

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