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¿Cuáles son los métodos de cuantificación del sistema QPCR?

Los procedimientos químicos, sin excepción, cualquiera que sea su fin, requieren de planeación, ya sea para lograr objetivos, descifrar su temporalidad y/o su costo de producción. En el caso de procedimientos moleculares, actualmente existen dos métodos cuantitativos básicos para distintas aplicaciones.

 El primero de ellos, consiste en la curva estándar o PCR en tiempo real (QPCR), también conocido como sistema qpcr, es el método más directo y preciso para analizar datos cuantitativos. Dicha curva se prepara de una serie de diluciones derivadas de una plantilla que contiene una concentración ya conocida para llevar a cabo su amplificación.

 Después de la amplificación de la serie de dilución estándar, se genera la curva estándar trazando el logaritmo del número de copia de plantilla inicial frente al Ct generado para cada dilución. Si la alícuota era exacta y la eficiencia de la amplificación no cambia en el intervalo de las concentraciones de plantilla que se utilizan, la trama de estos puntos debería generar una línea de regresión lineal.

 La QPCR, básicamente  detecta en tiempo real la amplificación de cualquier genoma de interés. Es de crítica importancia, llevar a cabo cada paso con cautela, cuidando la esterilidad del material hasta el resultado de la prueba.

 Su principal objetivo, es medir el nivel exacto de las plantillas de las muestras en estudios de diseño experimental. Las plantillas pueden ser de distintas variedades, tales como genes, DNA genómico, oligoelementos sintéticos, transcripciones in vitro, incluso, hasta RNA de total referencia humana.

 La curva estándar simplifica a largo plazo cálculos complicados y evita múltiples problemas prácticos y teóricos. Así, minimizando su evaluación de eficiencia, ya que se puede realizar de modo automático y proporcionando estadísticas de la evaluación dentro de la variación estipulada de PCR previa al estudio.

 Sus ventajas en comparación con la PCR convencional son el aumento en su sensibilidad de detección, es decir, permite detectar objetivos de copia baja con mayor confiabilidad e incluye un modelo dinámico de 1-100,000,0000,000 copias detectables en un mismo ciclo.

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Sofía Ramos
Sofía Ramos

Gerente de ventas LSG

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