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Cromatografía: Conceptos básicos

Estamos de acuerdo en que la mayoría de los métodos de análisis son, en los casos más favorables, selectivos pero no específicos. Es por esto que, cuando se trata de muestras complejas y la posibilidad de determinar varios analitos después de una separación previa, uno de los mejores métodos y el más utilizado hasta el momento es la cromatografía, ven que hoy hablaremos un poco de la cromatografía…

La cromatografía es un conjunto de técnicas que permiten la separación de componentes estrechamente  relacionados en mezclas complejas. En sus orígenes era exclusivamente una técnica de separación que se transformó en una técnica de análisis cuando se acopló con un dispositivo para monitorizar las especies químicas que se iban separando. Hoy en día, su principio se basa en que los solutos se separan en base a la distinta velocidad de desplazamiento cuando son arrastrados por una fase móvil a través de un lecho cromatográfico que contiene a una fase estacionaria solida o liquida. La muestra se disuelve en la fase móvil y se hace pasar por la fase estacionaria, previamente mencionada, que es inmiscible con la fase móvil, está se mantiene fija en una columna o sobre una superficie plana. Recordemos que las dos fases se eligen de tal modo que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre las dos fases y aquellos que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase móvil, mientras que los que se retienen débilmente avanzan con más rapidez.

Es de este modo que la cromatografía se ha convertido en un método analítico de primer orden para separar, identificar y cuantificar los compuestos presentes en muestras líquidas o gaseosas (si trabajamos con muestras solidas es necesario una etapa de disolución o extracción).

Todo bien hasta aquí cierto, bien sigamos con las técnicas cromatográficas con las cuales nos encontramos dependiendo del proyecto o estudio que realicemos. Estas se clasifican según el fundamento de la separación, es decir, según la naturaleza de las fases y tipo de interacciones. Entre estas clasificaciones encontramos:

Dependiendo de la fase estacionaria es el tipo de cromatografía que podemos implementar, para la fase estacionaria  sólida (donde encontramos solidos finamente divididos con una gran superficie específica) podemos implementar:

  • Cromatografía de adsorción donde la fase estacionaria sólida retiene a los solutos por un doble efecto de adsorción física y química, aquí observaremos que las interacciones son del tipo de van der Waals.
  • Cromatografía de intercambio iónico donde la fase estacionaria lleva en la superficie cargas electrostáticas fijas, que retienen iones móviles que pueden intercambiarse por iones de la fase móvil.
  • Cromatografía de exclusión molecular o Cromatografía de permeabilidad sobre gel (GPC), aquí observaremos que la fase estacionaria es un material poroso que retiene a las moléculas en función de su tamaño.

Ahora bien, si trabajamos con una fase estacionaria liquida, podemos implementar:

  • Cromatografía de partición, consiste en la separación de los componentes de una mezcla sobre una fase estacionaria constituida por un soporte sólido inerte cubierto por una película líquida que es fuertemente retenida por dicha fase.
  • Cromatografía de afinidad, es un proceso de la separación usado para purificar moléculas o un grupo de las moléculas que están en una mezcla bioquímica. Emplea dos fases; una fase estacionaria y una fase movible.

La siguiente clasificación es:

Es una técnica cromatográfica en la que la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de un mechero de una columna cromatográfica. La elución se produce por el flujo de una fase móvil de gas inerte. Y al igual que la LC podemos implementar diferentes tipos según su fase estacionaria, tales como:

  • Cromatografía de adsorción, aquí encontraremos que la fase estacionaria es un sólido poroso finamente granulado, siendo el proceso de adsorción debido a las atracciones intermoleculares dipolo-dipolo o puentes de hidrógeno entre otros componentes de la muestra y el adsorbente.
  • Cromatografía de partición, observaremos que la fase estacionaria es un líquido retenido por impregnación o por enlace sobre un sólido inerte, este tipo de cromatografía se basa en equilibrios de distribución.

Este solo es un resumen de los miles de métodos que podemos encontrar en la cromatografía, sin embargo es a partir de la LC y la GC que nace cada uno de estos métodos, sumándole claro la nueva tecnología de alta calidad que viene desarrollándose desde tiempo atrás. Ahora bien, teniendo estas bases ahora es importante conocer de forma más adecuada los parámetros que rigen a la cromatografía para poder implementarla adecuadamente y así detectar, si es que se presentan, problemas presentes en nuestros análisis cromatográficos, pero eso lo veremos en el siguiente blog.

¿Deseas saber más sobre equipos y métodos cromatográficos? ¿Requieres de una asesoría para resolver algún problema? Contáctanos estaremos para servirte, porque en Analitek…

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Delia Serna Guerrero
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